基金项目: 国家自然科学基金(编号:81702540)
作者:郭亮;肖峻;陶陶;
关键词:前列腺癌;;miR-9-5p;;增殖;;迁移;;侵袭
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.07.010
〔摘 要〕 目的探讨miR-9-5p对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能的分子机制。方法利用荧光定量PCR检测正常前列腺上皮细胞RWPE-1、前列腺癌细胞PC3和DU145中miR-9-5p的表达水平。利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miR-9-5p的PC3细胞(PC3/miR-9-5p),使用荧光定量PCR进行鉴定。利用CCK-8法分析PC3/miR-9-5p细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析PC3/miR-9-5p细胞迁移和侵袭能力的变化。利用生物信息学方法预测miR-9-5p的靶基因,并构建靶基因3’-UTR的野生型(WT)和突变型(Mut)荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法和荧光定量PCR验证预测结果是否正确。结果正常前列腺上皮细胞RWPE-1中miR-9-5p的表达水平显著高于前列腺癌细胞PC3和DU145。在稳定过表达miR-9-5p的PC3/miR-9-5p细胞中miR-9-5p的表达水平显著高于PC3细胞(P<0.01)和对照组细胞(PC3/miR-NC)(P<0.01)。细胞增殖能力检测显示,与PC3组(P<0.05)和PC3/miR-NC组(P<0.01)相比,PC3/miR-9-5p组在72 h和96 h时细胞活力显著降低。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,PC3/miR-9-5p组与PC3组和PC3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01)。生物信息学预测显示,miR-9-5p能够靶向结合CXCR4的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析显示,miR-9-5p能够靶向作用于CXCR4的3’-UTR抑制萤光素酶表达;荧光定量PCR检测结果显示,在过表达miR-9-5p能够显著抑制PC3细胞中CXCR4的表达。结论 miR-9-5p能够抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,这可能是通过靶向抑制CXCR4的表达来实现的。