基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:1708085QH222);;安徽高校省级自然科学研究项目(编号:KJ2016A353)
作者:张倩;金郁;姚湧;计永胜;汪学龙;
关键词:弓形虫;;三型溶血素蛋白;;逸出;;细胞凋亡
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.01.003
〔摘 要〕 目的检测外源性弓形虫三型溶血素(TgHly-Ⅲ)蛋白诱导弓形虫逸出的效果和分子机制。方法通过在线软件预测TgHly-Ⅲ的功能与结构,外源表达TgHly-Ⅲ蛋白,并用其孵育感染弓形虫的宿主细胞,用流式细胞仪在不同时间点检测逸出虫体数目;用免疫印迹检测宿主细胞凋亡相关蛋白的表达水平;用不同阻断剂阻断虫体钙离子、运动能力和细胞凋亡、程序性坏死通路,检测TgHly-Ⅲ诱导虫体逸出效果。结果 TgHly-Ⅲ在序列上具有较高的保守性,具有膜穿孔功能;外源表达的TgHly-Ⅲ可有效诱导弓形虫从宿主细胞逸出,并且此种逸出依赖于虫体内钙离子和虫体的运动能力;阻断宿主细胞凋亡途径后,TgHly-Ⅲ诱导虫体逸出效率显著降低,并且TgHly-Ⅲ孵育可以提高宿主细胞凋亡相关蛋白Bax的表达和JNK、p38的磷酸化水平。结论 TgHly-Ⅲ可以通过细胞凋亡途径诱导虫体从宿主细胞逸出,这类逸出与虫体钙离子和运动能力有关。