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β-TCP作用T淋巴细胞后调控BMSCs成骨分化的研究

安徽医科大学学报 2018 08 v.53 1168-1173     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:81371114;81771117);;安徽省自然科学基金(编号:1408085MKL29);;安徽省科技攻关项目(编号:1604a0802082)

作者:许敏;吴婷婷;何家才;

关键词:β-TCP;;骨髓间充质干细胞;;Th17;;IL-17A;;成骨分化

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.08.003

〔摘 要〕 目的体外探究β-TCP对T淋巴细胞的免疫调节作用,并研究该免疫调节作用对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法将不同浓度β-TCP浸提液与T淋巴细胞培养,采用CCK8法和台盼蓝染色法进行细胞活性检测。流式细胞技术和细胞共聚焦法检测β-TCP浸提液与磁珠分选的CD4~+T细胞培养后Th17亚群分化。收取β-TCP浸提液与T淋巴细胞作用后的上清液,ELISA法检测上清液中白介素(IL)-17A分泌量。将上清液再培养小鼠BMSCs,qRT-PCR法检测成骨分化相关基因碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的表达,ALP染色、茜素红染色法检测BMSCs的成骨分化的效果,Western blot法检测ALP和OCN的蛋白表达水平。结果 6.25~50 mg/ml的β-TCP浸提液可诱导CD4~+T淋巴细胞向Th17亚群分化,且当浸提液的浓度为25 mg/ml时,其诱导Th17亚群分化效果最好,同时该组上清液中IL-17A诱导小鼠BMSCs的成骨分化效果最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 25 mg/ml的β-TCP浸提液能够诱导T淋巴细胞向Th17亚群方向分化,Th17细胞分泌IL-17A介导BMSCs的成骨分化,为进一步的体内实验奠定基础。