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HPV16E5、E6和E7基因重组慢病毒载体的构建及其感染口腔上皮细胞

安徽医科大学学报 2016 07 v.51 940-944     字体:

基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:81172574);;皖南医学院人才引进科研启动基金资助

作者:项先旺;江彤;陈传俊;

关键词:人乳头状瘤病毒;;HPV16癌基因;;慢病毒载体;;口腔上皮细胞

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.07.005

〔摘 要〕 目的分别构建HPV16 E5、E6和E7癌基因的重组慢病毒载体感染人口腔上皮细胞,为研究E5基因对口腔上皮细胞的致癌机制奠定基础。方法克隆HPV16 E5、E6和E7基因,分别构建p LVX-Ac GFP-E5、p LVX-Ac GFP-E6和p LVX-Ac GFP-E7重组慢病毒载体,与包装质粒共转染293T细胞。收集3种慢病毒上清液,分别感染口腔上皮细胞、腺嘌呤素筛选感染细胞,RT-PCR和Western blot法检测目的基因的表达。结果成功构建p LVX-Ac GFP-E5、p LVX-Ac GFPE6和p LVX-Ac GFP-E7重组慢病毒载体,获得3种慢病毒上清液,筛选得到3个稳定的细胞株。RT-PCR和Western blot均可检测到HPV16 E5、E6和E7基因在口腔上皮细胞内表达。结论本研究构建的3个重组慢病毒载体能成功感染口腔上皮细胞。