基金项目: 炎症免疫性疾病安徽省实验室开放基金项目(编号:IMMDL202105);安徽医科大学第一临床医学院临床医学(“5+3”一体化)早期接触科研项目(编号:2021-ZQKY-59);
作者:薛茜,李鉴洋,高文茜,张玉侠
关键词:哺乳动物不育系20样激酶1;Cre-loxP;巨噬细胞;基因敲除小鼠;Hippo通路;
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.10.011
〔摘 要〕 目的 制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型。方法 利用MST1基因携带loxP位点的小鼠(Mst1flox/flox)和髓系细胞特异表达LysM-Cre小鼠杂交构建巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠(Mst1flox/floxLysM-Cre+,即Mst1ΔM/ΔM);通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增loxP位点和Cre基因进行基因型鉴定;通过定量PCR以及免疫荧光验证MST1在巨噬细胞中的敲除效率;通过流式细胞术检测肝脏主要免疫细胞群。结果 Mst1flox/floxLysM-Cre+,即Mst1ΔM/ΔM为巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠基因型;qPCR和免疫荧光检测表明骨髓来源的巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的MST1敲除效率达70%以上;流式检测表明敲除巨噬细胞MST1基因对小鼠肝脏的主要免疫细胞群无明显影响。结论 成功构建巨噬细胞特异敲除MST1小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病中的作用及机制奠定了基础。