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瑞替普酶融合蛋白的表达、纯化及分子伴侣对其复性的影响

安徽医科大学学报 2013 11 v.48 1287-1291     字体:

基金项目:

作者:王伟;邹文艺;范清林;宋礼华;

关键词:瑞替普酶;;融合蛋白;;分子伴侣;;复性

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.11.001

〔摘 要〕 目的构建瑞替普酶(r-PA)融合蛋白的原核表达体系,并研究DsbA、DsbC、pKJE7、pGro7、pTf16等分子伴侣对其复性的影响。方法将r-PA基因克隆到表达载体质粒PET-32a中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在宿主菌E.coli BL21中进行表达。在复性时分别添加不同分子伴侣,研究不同分子伴侣对融合蛋白体外复性的影响。结果SDS-PAGE和Western blot结果表明r-PA融合蛋白正确表达,分子伴侣DsbA、pKJE7、pTf16对融合蛋白的复性有明显效果,体外溶圈实验表明复性后的r-PA具有纤溶活性。结论分子伴侣能有效帮助r-PA融合蛋白的复性。