基金项目: 国家自然科学基金(编号：82170236);;安徽省重点研究与开发计划项目(编号：202104j07020037);;安徽省转化医学研究院科研基金(编号：2021zhyx-C61);;安徽医科大学第二附属医院国家自然科学基金面上孵育计划项目(编号：2020GMFY02);;安徽省教育厅高校科学研究项目(编号：YJS20210312)
作者：周洋;涂彬;宋凯;王娟;孙赫;孙峰;沙纪名;李锐;张野;陶辉;
关键词：ALKBH5;;心肌成纤维细胞;;心肌纤维化;;活化;;增殖
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.12.004
〔摘 要〕 目的 探讨6-甲基腺嘌呤(m~6A)去甲基化酶ALKBH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法 取1～3 d新生SD乳鼠心脏，剪碎消化后进行CFs原代培养，并在显微镜下观察细胞形态。细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型，模型构建成功后分别向各组细胞转染ALKBH5(慢病毒过表达ALKBH5)及慢病毒空载体24～48 h。运用RT-qPCR方法检测ALKBH5、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达；Western blot检测ALKBH5、α-SMA、CollagenⅠ及PCNA蛋白的表达；CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖活性变化。结果 在CFs活化增殖模型中，与对照组CFs相比，模型组CFs中ALKBH5蛋白和mRNA的表达降低，而与活化增殖相关蛋白PCNA、α-SMA及CollagenⅠ的表达增加。此外，在慢病毒转染ALKBH5过表达组的CFs中，α-SMA、CollagenⅠ和PCNA蛋白和mRNA同ALKBH5病毒空载体组相比表达下降。CCK-8与EdU染色实验表明，与空载体组相比，ALKBH5过表达组CFs增殖活性受到抑制。结论 过表达ALKBH5明显抑制CFs的增殖活性，提示ALKBH5可能是参与调控CFs活化增殖的关键因子。