基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:090413118)
作者:储婧;秦蓉;
关键词:胃癌;;细胞转染;;CDX2
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.11.033
〔摘 要〕 目的构建人同源基因CDX2真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC-823,研究过表达CDX2基因对胃癌细胞生物学行为的影响。方法从pcD-NA4/TO/Myc-HisA-CDX2载体质粒中扩增目的基因CDX2,克隆至pEGFP-C1中,得到pEGFP-C1-CDX2;脂质体介导法瞬时转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-CDX2至人胃癌细胞BGC-823中,G418筛选出阳性克隆后扩大培养,RT-PCR和Western blot技术检测各组胃癌细胞中CDX2基因mRNA和蛋白的表达情况,将挑选出的稳定株命名为BGC-823/CDX2细胞;流式细胞仪检测BGC-823细胞(未转染组)、BGC-823/EV细胞(空载体组)和BGC-823/CDX2(转染组)细胞的凋亡情况,MTT法观测各组细胞的增殖情况,细胞划痕试验检测各组细胞迁移能力,透射电镜观察转染细胞形态学的改变。结果①成功构建真核表达载体pEGFP-C1-CDX2;②成功筛选出稳定过表达CDX2基因的BGC-823胃癌细胞,即BGC-823/CDX2细胞;③与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2细胞中CDX2基因mRNA和蛋白表达明显上调;④与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2组细胞在转染72 h后出现了明显的生长抑制;⑤划痕实验显示:与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2组细胞的迁移能力降低;⑥与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2组细胞凋亡率并无明显增加。⑦电镜结果显示:与BGC-823组细胞相比,BGC-823/CDX2组细胞死亡较多,部分细胞可见核膜皱缩、染色质边集等早期凋亡现象。结论成功构建了稳定过表达CDX2基因的胃癌细胞株,而且CDX2过表达明显抑制胃癌细胞增殖,降低迁移能力,提示CDX2在胃癌中可能发挥抑癌基因的作用。