基金项目: 江苏省自然科学基金(编号:BK20191347、BK20210080);;江苏省高校优势学科建设工程项目(编号:2018-87);;徐州市卫生健康委科技项目(编号:XWKYSL20220135)
作者:张昕;李长顺;刘浩;朱绍跃;周猛;冯岩;张光东;
关键词:人牙龈成纤维细胞;;人参皂苷Rg1;;细胞增殖;;细胞迁移;;成骨分化
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.05.018
〔摘 要〕 目的探讨人参皂苷Rg1(GsRg1)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)增殖、迁移及成骨分化的影响及分子机制。方法采用组织块法分离培养HGFs,并进行形态学和免疫荧光鉴定;取第3代HGFs, CCK-8法检测6种浓度的GsRg1(0、6.25、12.5、25、50、100 mg/L)对HGFs增殖的影响;Transwell实验检测不同浓度GsRg1对HGFs迁移能力的影响;碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨能力;茜素红染色观察并定量钙结节;qRT-PCR检测COL-Ⅰ、OCN和OPN成骨基因表达;Western blot检测OCN、OPN和COL-Ⅰ以及PI3K/AKT信号通路相关分子的蛋白表达情况。结果与对照组比较,浓度为12.5、25、50、100mg/L GsRg1可明显提高HGFs增殖能力(P<0.05),其中100 mg/L GsRg1促增殖作用最强,6.25 mg/L GsRg1组与对照组比较差异无统计学意义;GsRg1处理后HGFs迁移能力增强,且呈浓度依赖。与对照组比较,100 mg/L GsRg1组ALP活性明显增加(P<0.01);茜素红染色钙结节定量明显增多(P<0.01);成骨相关基因OCN、OPN和COL-Ⅰ的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平随时间上调明显(P<0.05),而PI3K、AKT蛋白表达水平无明显变化。结论GsRg1可以促进HGFs增殖和迁移,100 mg/L GsRg1能够促进HGFs的成骨分化,可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。