基金项目: 国家自然科学基金(编号:81902838、81872246);;北京市自然科学基金(编号:7204284)
作者:林燕妮;吴淑蒙;任鑫鑫;谢天;李玲;叶棋浓;
关键词:NDR1;;真核表达载体;;肝癌;;c-Myc
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.04.019
〔摘 要〕 目的分析核Dbf2相关激酶1(NDR1)在肝癌中的表达和临床预后的意义,探究NDR1在肝癌细胞中的生物学功能及其调控机制。方法利用ENCORI数据库分析NDR1在肝癌组织及正常组织中的表达水平及其与肝癌患者生存率的关系。构建MYC-NDR1真核表达载体,转染肝癌HepG2细胞,通过蛋白质印迹法(Western blot)验证其表达;利用CCK-8法、细胞克隆形成实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力。利用ENCORI数据库分析NDR1与c-Myc表达的相关性,并利用蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)加药实验研究NDR1与c-Myc蛋白的关系。结果ENCORI数据库分析显示,NDR1在肝癌组织中的表达高于正常组织且NDR1高表达患者总生存率低于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.001);Western blot检测到MYC-NDR1蛋白条带;CCK-8法结果显示,MYC-NDR1组细胞生长速度快于空载体组(P<0.001);细胞克隆形成实验显示,MYC-NDR1组的克隆数高于空载体组(P<0.001);细胞划痕实验显示,MYC-NDR1组平均迁移距离大于空载体组(P<0.001);ENCORI数据库分析显示,NDR1与c-Myc表达有着相关性(R=0.184,P<0.001);CHX加药实验显示,在相同时间内,MYC-NDR1组中c-Myc蛋白的减少量低于空载体组。结论NDR1在肝癌组织中高表达,与肝癌患者预后不良紧密相关,并与c-Myc基因的表达呈正相关;该研究成功构建了MYC-NDR1真核表达载体,表达产物MYC-NDR1能够增加c-Myc蛋白的稳定性,促进人肝癌细胞增殖和迁移。