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一种快速构建重组腺病毒的简便方法

安徽医科大学学报 2002 01 14-18     字体:

基金项目: 国家 8 6 3计划生物;; 现代农业技术领域资助项目 (编号 :2 0 0 1AA2 15 0 11)

作者:何金生,王健伟,温乐英,洪涛

关键词:腺病毒科;;重组,遗传;;轮状病毒

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2002.01.006

〔摘 要〕 目的 对腺病毒AdEasy载体系统进行方法改良 ,使之成为能被一般实验室采用的快速构建重组腺病毒的系统。方法 用插入有G1VP7基因和绿色荧光蛋白的穿梭载体pAdTrackCMV与腺病毒骨架载体pAdEasy 1共转化E .coliBJ5 183并进行同源重组 ,获得重组腺病毒质粒 ,经PacⅠ线性化后 ,转染 2 93细胞。为便于操作 ,对AdEasy载体系统的某些操作过程进行了适当改进。结果 得到重组腺病毒rvAdG1VP7(G)。转染重组腺病毒DNA的 2 93细胞出现细胞病变 ,经PCR对传代的rvAdG1VP7(G)分析证实 ,有特异性的G1VP7基因整合 ,荧光显微镜能观察到 2 93细胞内有绿色荧光。结论 腺病毒AdEasy载体系统是一种较为简便、快速的构建重组腺病毒的好方法 ,经过适当改进后更适合于国内实验室的研究和应用