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人非肌肉肌球蛋白轻链激酶N端表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

安徽医科大学学报 2002 01 11-13     字体:

基金项目: 国家自然科学基金 (编号 :39870 32 4);; 教育部优秀年轻教师基金;; 安徽省自然科学基金 (编号 :990 44312 );; 安徽省教育厅自然科学基金 (编号 :99JL0 0 90 )

作者:胡若磊,朱华庆,周青,桂淑玉,汪渊

关键词:肌球蛋白轻链激酶;;聚合酶链反应;;大肠杆菌;;人

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2002.01.005

〔摘 要〕 目的 构建人非肌肉肌球蛋白轻链激酶 (hnmML CK)N端表达载体及其体外表达与表达产物的纯化。方法 用PCR方法扩增hnmMLCK的N端cDNA ,插入质粒 pBK cmv中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌XL1 blue ,经IPTG诱导表达 ,表达产物用电洗脱的方法初步纯化。结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为hnmMLCK重组质粒 ,SDS PAGE证实获得分子量为 2 1ku的融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 1%。结论 成功构建了重组hnmMLCK表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究及临床应用奠定了良好基础