基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:11040606M170);;安徽医科大学双肩挑干部学术恢复科研专项(编号:0112011109)
作者:李强;李彩红;周恒;乔兵;刘建军;范礼斌;
关键词:视网膜母细胞瘤蛋白;;过表达;;细胞周期;;凋亡
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.09.002
〔摘 要〕 目的 探究视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)截短体p100Rb和p80Rb对细胞周期、凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-p100Rb-FLAG、pcDNA3.1-p80Rb-FLAG真核表达质粒;分别转染至U2OS细胞中,进行免疫荧光制片,检测p100Rb和p80Rb细胞定位情况;将pcDNA3.1-RB1-FLAG、p100Rb和p80Rb分别转染至HEK 293T细胞中,提取总蛋白进行免疫印迹,检测Rb、p100Rb和p80Rb的过表达;过表达Rb、p100Rb和p80Rb后利用流式细胞术检测细胞周期、凋亡。结果成功构建pcDNA3.1-p100Rb-FLAG和pcDNA3.1-p80Rb-FLAG真核表达质粒;在U2OS细胞中p100Rb主要定位在细胞核,p80Rb主要定位在细胞质;Rb、p100Rb和p80Rb在HEK 293T细胞中可过表达;过表达Rb、p80Rb和p100Rb后,与对照组比较,过表达的Rb实验组和p100Rb实验组细胞周期G1期百分比升高,各实验组细胞的凋亡率均显著降低(均P<0.05)。结论过表达p100Rb可抑制HEK 293T细胞凋亡且阻滞细胞周期;过表达p80Rb可抑制HEK 293T细胞凋亡但对细胞周期无影响。