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石斛多糖DOP-1-1的制备及其体外促进骨形成的机制

安徽医科大学学报 2022 09 v.57 1360-1366     字体:

基金项目: 遵义市科技计划项目(编号:遵市科合HZ字[2020]236号);;贵州省卫生健康委科学技术基金项目(编号:gzwjkj2019-1-195)

作者:申雄成;蔡小军;董革辉;黄家恺;张晗祥;何斌;

关键词:铁皮石斛多糖;;结构鉴定;;前成骨细胞;;多肽脯氨酰顺反异构酶;;骨形态发生蛋白-2

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.09.004

〔摘 要〕 目的 制备石斛多糖(DOP-1-1)并探讨其对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化作用。方法从铁皮石斛多糖(DOP)中系统分离纯化获得了一种均质多糖(DOP-1-1),并通过高效凝胶渗透色谱法、单糖分析、红外光谱、甲基化分析、GC-MS和核磁共振光谱研究了DOP-1-1的结构。体外实验分别通过MTT法、ALP活性测定和茜素红S染色检测DOP-1-1对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。同时,采用Western blot测定DOP-1-1对MC3T3-E1细胞中骨相关蛋白质(Pin1、BMP2、RUNX2)的表达影响。结果DOP-1-1是一种均质多糖,其相对分子量为3 611,由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成。DOP-1-1在低浓度下促进成骨细胞增殖的活性,其中2.0、4.0μmol/L DOP-1-1的作用相当于阳性对照17β-雌二醇(E2)。与对照组比较,E2和DOP-1-1(4.0、8.0μmol/L)使MC3T3-E1细胞中ALP活性和矿化率增加(P<0.01)。特别是,DOP-1-1(8.0μmol/L)的ALP活性和矿化率高于阳性对照E2(P<0.001)。此外,DOP-1-1组MC3T3-E1细胞中Pin1、BMP2、RUNX2蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论DOP-1-1体外能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,作用机制与激活Pin1/BMP2信号通路相关。