基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:32270941);
作者:李晓宇;赵殿元;张胜权;杨靖;唐丽
关键词:Csf1rCre重组酶;报告基因小鼠;流式细胞术;组织定居巨噬细胞;单核细胞;细胞标记效率;
DOI:
〔摘 要〕 目的构建Csf1rCre Rosa26YFP报告基因小鼠,检测Csf1rCre介导黄色荧光素蛋白(YFP)标记单核细胞及不同组织定居巨噬细胞的效率。方法 Rosa26YFP突变小鼠具有一个loxP侧翼的STOP序列,后跟插入Rosa26基因座的黄色荧光蛋白基因(YFP)。当与表达Csf1rCre重组酶的小鼠交配时,STOP序列被删除,并在双突变后代Csf1rCre Rosa26YFP的表达组织中观察到YFP表达。将Csf1rCre小鼠与Rosa26YFP小鼠交配,通过PCR筛选出Csf1rCre Rosa26YFP报告基因小鼠。分离成年Csf1rCre Rosa26YFP小鼠的血液及骨髓单核细胞、肝脏巨噬细胞、肾脏巨噬细胞、肺泡巨噬细胞和脾脏巨噬细胞,标记流式抗体,通过流式细胞术分析Csf1rCre介导YFP标记组织巨噬细胞的效率。结果Csf1rCre Rosa26YFP报告基因小鼠中肾脏、肝脏、脾脏、肺泡、巨噬细胞表达YFP中位数为93.25%、92.45%、91.10%、94.70%,血液单核细胞表达YFP中位数为98.20%,骨髓单核细胞表达YFP中位数为93.90%。结论Csf1rCre可以介导YFP 对各组织定居巨噬细胞以及骨髓和血液单核细胞进行示踪。同时,Csf1rCre可用作这些细胞的基因条件性敲除工具鼠。