基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:82173725、31400680);高校中青年教师培养行动项目(编号:DTR2024005)~~
作者:沈悦;郑红;范新炯;
关键词:羰基还原酶;ChKRED20;His⁃tag;酶学性质;大肠埃希菌;蛋白可溶性
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.08.001
〔摘 要〕 探究提升羰基还原酶 ChKRED20 可溶性的方法并测定其酶学性质 。方法 合成 ChKRED20 基因并转化至大肠埃希菌 BL21(DE3)中进行异源表达,通过增减和改变 His⁃tag 位置、改变发酵条件等研究蛋白可溶性,并进一步优化诱导时间、温度及异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度等以提升重组蛋白的表达,随后研究重组酶的酶学性质。结果 利用 ChKRED20原核表达菌株,在大肠埃希菌表达体系内去除 His⁃tag 并进行发酵条件优化,以获得最优可溶蛋白表达;无 His⁃tag ChKRED20比携带 N 端和 C 端 His⁃tag 的蛋白酶活性分别提高了 0. 77 和 1. 28 倍;最适温度为 55 ℃ , 最适 pH 为 8. 0;且该酶在较下,碱性环境中仍具有较好的适应性 。结论 去除 His⁃tag 及优化发酵条件可以大大提升 ChKRED20 在大肠埃希菌中的可溶性。