• 《中文核心期刊要目总览》收录期刊
  • 《科技期刊世界影响力指数(WJCI)报告》入选期刊        
  • 美国《化学文摘(网络版)》收录期刊        
  • 美国《剑桥科学文摘社生命科学文摘数据库》收录期刊
  • 美国《剑桥科学文摘社ProQeust数据库》收录期刊
  • 《全球公共卫生数据库》收录期刊
  • 《日本科学技术振兴机构数据库2024》收录期刊
  • 安徽省“精品栏目”期刊(2022年)       
  • 中国高校科技期刊建设示范案例库优秀科技期刊(2022年)
  • 安徽省“十佳科技期刊” (2023年)

羰基还原酶ChKRED20可溶性表达的提升及酶学性质研究

安徽医科大学学报 2025, 08, v.60 1365-1372     字体:

基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:82173725、31400680);高校中青年教师培养行动项目(编号:DTR2024005)~~

作者:沈悦;郑红;范新炯;

关键词:羰基还原酶;ChKRED20;His⁃tag;酶学性质;大肠埃希菌;蛋白可溶性

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.08.001

〔摘 要〕 探究提升羰基还原酶 ChKRED20 可溶性的方法并测定其酶学性质 。方法 合成 ChKRED20 基因并转化至大肠埃希菌 BL21(DE3)中进行异源表达,通过增减和改变 His⁃tag 位置、改变发酵条件等研究蛋白可溶性,并进一步优化诱导时间、温度及异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度等以提升重组蛋白的表达,随后研究重组酶的酶学性质。结果 利用 ChKRED20原核表达菌株,在大肠埃希菌表达体系内去除 His⁃tag 并进行发酵条件优化,以获得最优可溶蛋白表达;无 His⁃tag ChKRED20比携带 N 端和 C 端 His⁃tag 的蛋白酶活性分别提高了 0. 77 和 1. 28 倍;最适温度为 55 ℃ , 最适 pH 为 8. 0;且该酶在较下,碱性环境中仍具有较好的适应性 。结论 去除 His⁃tag 及优化发酵条件可以大大提升 ChKRED20 在大肠埃希菌中的可溶性。