基金项目: 安徽省自然科学基金项目(编号:1808085MH270);安徽省高校科研计划项目(编号:2024AH050797);合肥市自然科学基金项目(编号:2021038);
作者:凌辉;汪先晨;尤峻柏;范家好;崔笑;沙纪名;余立权
关键词:RUNX3;肝星状细胞;活化;增殖;迁移;肝纤维化;胶原沉积;
DOI:专辑:医药卫生科技
〔摘 要〕 目的 探讨靶向沉默矮小相关转录因子3(RUNX3)对小鼠肝星状细胞(HSCs)的增殖和迁移以及随后的胶原沉积等作用。方法 选取小鼠肝星状细胞系(JS-1),在显微镜下观察并鉴定形态。待细胞完全贴壁后使用5 ng/mL 转化生长因子β1(TGF-β1)作用24 h诱导HSCs活化,并用RUNX3慢病毒感染构建RUNX3沉默模型,实验分为Control组、TGF-β1组、TGF-β1+siRNA-NC组和TGF-β1+siRNA-RUNX3组。Westernblot实验检测RUNX3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(CollagenI)的蛋白表达变化;细胞免疫荧光实验检测α-SMA、RUNX3在HSCs中的表达定位变化;RT-qPCR检测RUNX3、α-SMA、CollagenI的mRNA表达变化;EdU染色检测HSCs增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测HSCs的迁移能力。结果 与对照组比较,经TGF-β1诱导后,HSCs中RUNX3的表达显著增加(P<0.01)。与此同时,纤维化相关指标α-SMA、CollagenI的蛋白及mRNA水平均显著上调(P<0.001),且细胞增殖与迁移能力亦明显增强(P<0.001)。而与TGF-β1+siRNA-NC组相比在TGF-β1+siRNA-RUNX3组中的RUNX3以及α-SMA、CollagenI的蛋白及mRNA水平均明显降低(P<0.001),与此同时,HSCs的增殖和迁移能力也被明显抑制(P<0.01)。结论 沉默RUNX3能够抑制HSCs中胶原的沉积及HSCs的增殖和迁移,相反,RUNX3可以促进HSC的增殖和迁移能力,并促进HSC的活化。