〔摘　要〕 目的 探讨Lck/Yes相关新型酪氨酸激酶（Lyn）对脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞M1型极化的作用及机制。方法 使用BSMBI-V2限制性内切酶酶切LentiCRISPR-V2质粒，回收酶切后的DNA片段，用T4连接酶连接酶切质粒与Lyn-sgRNA，制备Lenti-Lyn-gRNA慢病毒，用Lenti-Lyn-gRNA慢病毒感染THP-1细胞获得敲除Lyn基因的THP-1稳转株，得到完全敲除Lyn的THP-1单克隆细胞株(Lyn^-/-)。采用100ng/mL佛波酯（PMA）诱导Lyn野生型(Lyn^WT)和Lyn^-/-THP-1细胞48h分化为M0巨噬细胞，用100ng/mLLPS诱导M0巨噬细胞24h极化为M1巨噬细胞。通过荧光实时定量PCR（qPCR）检测M0巨噬细胞标志物整合素αM（CD11b）、巨噬细胞抗原CD68和单核细胞分化抗原CD14的表达。qPCR检测野生型THP-1细胞分化的M1巨噬细胞(Lyn^WT-M1)中Lyn表达，Westernblot检测Lyn^WT-M1细胞中磷酸化Lyn（P-Lyn）/Lyn。qPCR检测野生型敲除Lyn基因的THP-1细胞分化的M1巨噬细胞(Lyn^-/--M1)一氧化氮合酶iNOS、白介素-6和趋化因子-10 （CXCL-10）mRNA表达；Westernblot检测iNOS蛋白表达及JAK1-STAT1信号通路相关分子Janus激酶1 （JAK1）、磷酸化JAK1（P-JAK1）和信号转录与转录激活因子1 （STAT1）、磷酸化STAT1（P-STAT1）的蛋白表达。流式细胞术检测M1巨噬细胞标志物抗原分化簇80（CD80）的表达。结果 成功构建Lyn^-/-单克隆细胞株。Lyn^-/--M0巨噬细胞CD11b表达量明显升高（P<0.0001），表明THP-1巨噬细胞分化成功。分化为M1巨噬细胞后Lyn的mRNA和蛋白表达升高（P<0.05），Lyn促进M1巨噬细胞的极化。敲除Lyn抑制M1巨噬细胞iNOS、IL-6、CXCL-10的mRNA表达、iNOS的蛋白表达和CD80的表达。Westernblot检测结果显示Lyn敲除后抑制M1巨噬细胞JAK1和P-STAT1的蛋白表达。结论CRISPR/Cas9敲除Lyn后，M1巨噬细胞JAK/STAT信号通路中的关键分子JAK1与P-STAT1表达水平显著下调的同时，M1巨噬细胞特异性分泌因子iNOS、IL-6、CXCL-10及CD80表达也下调，可能是通过靶向调控JAK1/P-STAT1介导的JAK/STAT 信号通路来实现的。