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一种基于OX40L胞内域的靶向IL-13Rα CAR巨噬细胞的构建与验证

安徽医科大学学报     字体:

基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:82373877);

作者:薛慧;薛梓萌;陈维乐;邱佳琪;朱梦娟;陈义昭;涂佳杰

关键词:嵌合抗原受体;巨噬细胞;胶质瘤;吞噬效应;OX40L;免疫治疗;

DOI:专辑:医药卫生科技

〔摘 要〕 目的 构建靶向白细胞介素-13受体α(IL-13Rα)且胞内域整合可双重激活巨噬细胞与T细胞的信号接头蛋白OX40L的嵌合抗原受体巨噬细胞(CAR-M)。方法 设计并合成以OX40L为胞内信号域、靶向IL-13Rα的CAR分子(IL-13Rα-OX40L-CAR),将其定向克隆至腺病毒表达载体。采用佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞(THP-1-M)后,用重组腺病毒感染该细胞,构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)标记的anti-IL-13RαCAR的THP-1巨噬细胞。通过流式细胞术监测CAR分子的表达效率;以空载体组为阴性对照、CD3ζ组为阳性对照、OX40L-CD3ζ组为实验组,通过体外共培养实验,检测各组巨噬细胞对IL-13Rα高表达胶质瘤细胞(U251)及低表达胶质瘤细胞(T98G)的吞噬功能差异。结果CAR腺病毒高效率转染THP-1-M,获得anti-IL-13RαCAR-M。与不同IL-13Rα表达水平的胶质瘤细胞共培养后,流式细胞术结果显示,对于低表达IL-13Rα的T98G细胞,三组间差异无统计学意义;在与IL-13Rα高表达的U251细胞共培养后,与空载体组相比,CD3ζ组表现出增强的吞噬作用(P<0.05),与CD3ζ组相比,OX40L-CD3ζ组吞噬能力进一步增强(P<0.05)。结论 通过构建IL-13Rα-OX40L-CAR腺病毒并转染经PMA诱导分化的THP-1-M,成功构建了anti-IL13Rα-OX40L-CAR-M,且其能通过特异性靶向吞噬高表达IL-13Rα的胶质瘤细胞,并表现出优于传统CD3ζ胞内域的激活。