〔摘　要〕 目的 构建C57BL/6N背景的Il9（Il9）基因敲除小鼠模型，建立可靠的基因型鉴定方法，为Il9相关免疫机制及疾病研究提供标准化动物模型。方法 采用常规基因敲除技术构建Il9基因敲除小鼠品系(C57BL/6N-Il9^em1Cya)；优化鼠尾DNA提取方法以保障模板质量；设计2组特异性引物（F1/R1、F1/R2），通过PCR技术扩增目的片段，结合琼脂糖凝胶电泳判读小鼠基因型，其中F1/R1引物针对敲除序列（预期产物465bp），F1/R2引物针对野生型序列（预期产物703bp）。随后采用Westernblot技术针对主要免疫细胞及关键脏器验证后代小鼠中Il9基因的敲除效果，并使用流式细胞术针对主要免疫细胞检测Il9基因的敲除对免疫系统功能是否有影响。结果 成功繁育并鉴定了Il9基因敲除小鼠，PCR鉴定结果显示，纯合子（-/-）仅出现465bp条带，野生型（+/+）仅出现703bp条带，杂合子（+/-）同时出现两条条带；同时Westernblot检测结果显示，子代小鼠各脏器中IL-9表达显著降低（P<0.001），流式细胞术结果显示Il9基因敲除对外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞、腹腔巨噬细胞比例无明显影响。结论 成功构建C57BL/6N背景的Il9基因敲除小鼠模型，建立的PCR基因型鉴定体系高效、精准，可有效区分不同基因型小鼠，为后续Il9功能研究及相关疾病机制探索提供稳定可靠的实验基础。