安徽医科大学学报
2021 04 v.56 550-555
字体：大 中 小
基金项目: 国家自然科学基金(编号：81572468);国家自然科学青年基金(编号：81802493);;江苏省青年医学重点人才培养项目(编号：QNRC2016188)
作者：汪京京;张真豪;穆会君;龚玲丽;邹健;殷莹;
关键词：CRISPR/Cas9;;同义突变;;基因回补;;SRSF9;;神经胶质瘤
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.04.009
〔摘 要〕 目的在CRISPR/Cas9敲除SRSF9基因的胶质母细胞瘤U87单克隆株中进行SRSF9基因回补并进行回补功能研究。方法构建SRSF9-WT过表达载体并同义突变sgRNA1靶序列上的5个碱基构建SRSF9-sgMu过表达载体并包装成慢病毒，感染U87SRSF9基因敲除单克隆细胞，构建SRSF9基因回补细胞株。利用Western blot和免疫荧光实验验证回补蛋白的定位，利用增殖和肿瘤干细胞成球实验验证回补基因的拯救功能。结果成功构建SRSF9-WT和SRSF9-sgMu过表达载体并包装成慢病毒。Western blot和免疫荧光实验验证回补成功，且回补的SRSF9蛋白优势表达于细胞核。增殖和肿瘤干细胞成球实验证明回补的SRSF9可以拯救其功能(P<0.05)。结论SRSF9-sgMu成功在SRSF9基因敲除的U87单克隆细胞中回补SRSF9并拯救增殖和肿瘤干细胞成球功能。