基金项目: 安徽省高等学校省级质量工程项目(编号:2013tszy011)
作者:沈鸿涛;刘雪;吴婷婷;窦仁刚;吴建贤;洪永锋;
关键词:HT22;;TNF-α;;凋亡;;铁皮石斛多糖
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.08.013
〔摘 要〕 目的探究铁皮石斛多糖(DOP)能否抑制由肿瘤坏死因子-α(TNF-α)引起的神经细胞凋亡,以及其抑制凋亡的最佳浓度。方法分别采用不同浓度的TNF-α对小鼠海马神经元细胞系(HT22)进行培养,确定TNF-α诱导HT22细胞凋亡的最佳浓度;再将不同浓度的DOP与最佳浓度的TNF-α共同培养HT22细胞24 h后,采用PCR、Western blot检测凋亡相关基因和蛋白的表达,查找DOP抑制HT22细胞凋亡的最佳作用浓度;之后,同时通过吉姆萨染色、赫斯特(Hoechst)染色、原位末端转移酶标记技术(Tunel)染色、流式细胞术观察HT22细胞凋亡数量及比例的变化。结果与正常培养组比较,TNF-α可增加HT22细胞中凋亡相关基因的表达,且最佳浓度为5 ng/ml (P<0.000 1)。与5 ng/ml TNF-α组比较,各浓度DOP均可抑制HT22细胞凋亡基因的表达,其中20μg/ml和25μg/ml DOP组的抑制效果最为明显(P <0. 001);且20μg/ml和25μg/ml DOP组相关蛋白的表达、HT22细胞的凋亡数量和比例均显著低于5 ng/ml TNF-α组(P <0. 001)。结论 DOP可以抑制由TNF-α引起的HT22细胞凋亡,且其浓度在20μg/ml和25μg/ml时的抑制效果最佳。