胡景春;唐虹;薛威;江勤;张骏艳;董六一;
摘要:
目的探讨牡荆素调节自噬与自噬流介导缺氧复氧大鼠原代心肌细胞的保护作用。方法采用原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模拟缺血再灌注损伤。CCK-8检测心肌细胞的活力。试剂盒检测心肌细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平。2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测原代心肌细胞中活性氧(ROS)的水平。自噬双标记腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染原代心肌细胞,观察自噬小体和自噬溶酶体数量。Western blot检测LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1、P62蛋白的表达。结果大鼠原代心肌细胞缺氧复氧后, H/R组心肌细胞活力显著降低,LDH漏出增多,心肌细胞内ROS水平明显升高,而牡荆素各剂量组可提高缺氧复氧心肌细胞活力,抑制心肌细胞的LDH释放,降低心肌细胞中ROS水平。心肌细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后,检测结果显示,与正常对照组比较,H/R组心肌细胞出现明显的自噬和自噬流增强,而牡荆素各剂量组可抑制心肌细胞H/R后的自噬和自噬流增强,减少心肌细胞内自噬小体的累积。另外,Western blot结果显示,与正常对照组比较,H/R组原代心肌细胞中自噬蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ蛋白表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大,而P62蛋白表达下调。与H/R组比较,牡荆素各剂量组均不同程度抑制Beclin 1上调,降低LC3Ⅱ蛋白表达,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值减小,同时上调P62蛋白表达。结论牡荆素对大鼠原代心肌细胞H/R损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抑制心肌细胞H/R后ROS产生,抑制自噬和自噬流增强,减少心肌细胞自噬体累积,防止过度自噬有关。