基金项目: 国家重点研发计划项目(编号:2023YFE0100800)~~
作者:侯梦龙;齐心语;吴建凤;廖启超;马杰;周磊;李一星;
关键词:肝白血病因子;条件性胰岛 β 细胞;RT⁃qPCR;Western blot;基因敲除;C57BL/6J 小鼠
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.08.010
〔摘 要〕 为了探究肝白血病因子( HLF) 在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛 β 细胞 HLF 基因敲除小鼠动物模型。方法 在细胞水平上,通过 CCK⁃8 试验验证 HLF 抑制或过表达对 MIN6 细胞增殖的影响 。通过 RT⁃qPCR 和 Western blot , 分别在 mRNA 水平和蛋白水平检测 HLF 抑制或过表达效果 。将 HLFflox/flox 转基因小鼠与 Pdx1⁃Cre + / - 小鼠( C57BL/6J) 杂交繁育,获得子代小鼠 。利用 PCR 方法鉴定小鼠基因型,通过 RT⁃qPCR 技术和 Western blot 检测 HLF 基因在胰岛 β 细胞敲除小鼠(HLFflox/flox Cre + / - )和对照小鼠(HLFflox/flox )中的 mRNA 水平和蛋白水平表达差异,验证敲除效果 。同时取 2 组小鼠的胰岛组织制作石蜡切片并进行苏木精 - 伊红( HE) 染色分析 。结果 HLF 基因抑制或过表达对 MIN6 细胞增殖无显著影响 。在MIN6 细胞中抑制 HLF 基因,其 mRNA 表达水平较对照组下降了 74% , 蛋白表达水平较对照组下降了 60%;过表达 HLF 基因后,其 mRNA 表达水平为对照组的 2. 13 倍,蛋白表达水平为对照组的 1. 8 倍 。敲除小鼠的 HLF 基因 mRNA 表达水平较对照组下降了 89% , 蛋白表达水平较对照组下降了 65% 。HE 染色结果显示:敲除小鼠胰岛组织内细胞形态与对照小鼠无明显差异 。抑制 HLF 使 MIN6 细胞中糖原含量提高约 20% 。结论 成功构建 HLF 基因敲除小鼠,为研究 HLF 在糖尿病发病机制中的作用提供了动物模型。