贾琳1,2孙峰1,2董琪琪1,2杨晶晶2周仁鹏1,2胡伟1,2鲁超1,3
摘要:
目的 探究YTH结构域家族蛋白1(YTHDF1)调控线粒体分裂蛋白1(Fis1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(HSCs)活化、增殖和迁移能力的影响。方法 应用5 ng/ml TGF-β1处理小鼠肝星状细胞株JS-1 24 h以诱导其活化和增殖,并使用YTHDF1-siRNA构建YTHDF1沉默模型。实验分为Control组、TGF-β1组、TGF-β1+si-NC组和TGF-β1+si-YTHDF1组。通过逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)实验检测YTHDF1、Fis1及纤维化关键指标Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化;利用CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测细胞迁移能力;使用免疫荧光染色实验检测YTHDF1对Fis1介导的线粒体裂变的影响;最后通过JC-1染色实验检测YTHDF1对线粒体膜电位的影响。结果 与Control组相比,RT-qPCR和Western blot实验结果显示,TGF-β1组中YTHDF1和Fis1的表达增加(P<0.05,P<0.01;P<0.000 1),以及纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的表达水平增加(P<0.01;P<0.001,P<0.000 1);CCK-8实验结果显示,TGF-β1组中HSCs的增殖能力增强(P<0.000 1);Transwell实验结果显示,TGF-β1组中HSCs的迁移能力增强(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组中HSCs的迁移能力增强(P<0.000 1);免疫荧光实验结果显示,TGF-β1组中Mito-Tracker Red染色与Fis1共定位信号增加(P <0.05);JC-1染色实验结果显示,TGF-β1组中线粒体膜电位升高(P<0.01)。与TGF-β1+si-NC组相比,RT-qPCR和Western blot实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中YTHDF1和Fis1的表达降低(P<0.01;P<0.001),纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的水平降低(P<0.01;P<0.001,P<0.01),CCK-8实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中HSCs的增殖能力减弱(P<0.000 1);Transwell实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中HSCs的迁移能力减弱(P<0.001);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中HSCs的迁移能力减弱(P<0.000 1);免疫荧光实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中Mito-Tracker Red染色与Fis1共定位信号减少(P<0.01);JC-1染色实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中线粒体膜电位下降(P<0.05)。结论 YTHDF1通过正向调控Fis1介导的线粒体裂变,促进了HSCs的活化、增殖和迁移能力。提示YTHDF1可能是参与调控HSCs活化、增殖和迁移的关键基因。
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