2013年第五期_2013__安徽医科大学学报

主管单位：安徽省教育厅

主办单位：安徽医科大学

主编：翁建平

编辑出版：《安徽医科大学学报》编辑部合肥市梅山路安徽医科大学校内

邮编：230032

印刷：安徽联众印刷有限公司

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国内总发行：安徽省合肥市邮政局

邮发代号：26-36

国外发行代号：中国国际图书贸易集团公司（地址：北京市海淀区车公庄西路35号，邮政编码：100048，代号MO5933）

定价：10.00元/期，120.00元/年

中国标准连续出版物号：

ISSN 1000 - 1492

CN 34 - 1065/R

电话：（0551）65161103、65161192

E-mail : aydxb@vip.163.com（投稿）；aydxbsg@163.com（审稿）

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2013年第五期

显示方式:

细胞内氯离子通道蛋白2的定位与表达

徐南;潘林鑫;耿慧武;李春雨;刘晓颖;范礼斌;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.001

浏览(153)

rhBMP-2联合rhVEGF165对兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合的影响

周平;赵其纯;尚希福;王姚斐;李旭;纪小枫;凌晓冬;朱亚林;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.002

浏览(136)

中药保健烟致慢性阻塞性肺疾病的实验研究

刘佳;赵玉雪;李进涛;倪师今;于浩飞;张荣平;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.003

浏览(143)

Piwil2基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化

李跃波;冯定庆;凌斌;程敏;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.004

浏览(131)

大学男生吸烟与性行为现状调查

杨璐瑛;徐炜;邵继红;陆召军;卓朗;高修银;顾玉洪;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.005

浏览(137)

团体箱庭疗法对留守初中生适应不良干预效果研究

章鸣明;曹召伦;顾晨龙;汪凯;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.006

浏览(151)

夏枯草总三萜对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

解丹;黄成;林珍;周德喜;孔令娜;杨莹莹;李俊;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.007

浏览(144)

油包水型芍药苷微乳在大鼠肠道的吸收动力学研究

袁君;王春;杨昭毅;聂欣欣;魏伟;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.008

浏览(139)

豹皮樟总黄酮预防急性炎症与内质网应激的关系

钟健;李俊;黄成;余世春;马陶陶;陈昭琳;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.009

浏览(141)

MMP-7和bFGF mRNA在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

程媛媛;张令达;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.010

浏览(146)

安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究

张莹;曾宪聪;汪小五;刘淑均;李进;王林定;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.011

浏览(145)

黄嘌呤氧化还原酶表达对鼻咽癌预后的影响

杨见明;陶冶;邓雪飞;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.012

浏览(138)

卵巢癌患者呼气中挥发性标志物的筛查

石大友;刘虎;陶丽;张静;丁露;张伟;花庆岭;庄亚丽;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.013

浏览(139)

慢性肾脏病Ⅲ～Ⅴ期患者贫血的发生及其相关因素分析

王玲;吴永贵;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.014

浏览(132)

Vimentin及E-Cadherin在子宫颈癌中的表达及其与上皮细胞间质化的相关性

申震;周颖;赵卫东;程勇;徐汉杰;杨春梅;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.015

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颅脑损伤后应激不良的临床研究

丁宛海;牛朝诗;傅先明;张建宁;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.016

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膝骨关节炎患者血清瘦素水平变化及其临床意义

何凡;徐建华;丁长海;张明铭;张锐;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.017

浏览(139)

膀胱尿路上皮癌淋巴结微转移的检测及其对患者预后的影响

曹琦;张志强;于德新;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.018

浏览(146)

神经根沉降症与腰椎管狭窄的相关性研究

汪大明;杨庆国;高胜山;王磊;张银顺;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.019

浏览(135)

SWI测量脑铁沉积在帕金森病中的临床应用价值

王书健;邓克学;郑春生;黄柿兵;刘曙光;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.020

浏览(130)

不同年龄段行腭裂手术对颌骨发育及语音影响的临床研究

程鑫;黄万元;丁丁;阚存辉;王银龙;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.021

浏览(136)

新疆维吾尔族HLA-DQB1基因多态性与HBV感染结局的相关性

梁军;张永萍;杨晓筠;张艳君;仲英娜;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.022

浏览(139)

中国汉族人群中YWHAE基因与帕金森病的相关性研究

李林海;陈丽丹;廖杨;陈建芸;石玉玲;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.023

浏览(145)

鼻内镜下翼腭窝区应用解剖学观察

袁旭;方平;赵益;王瑞;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.024

浏览(144)

不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响

张媛媛;周平;彭广兰;陈大蔚;章志国;曹云霞;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.025

浏览(138)

特异性标记胚胎干细胞分化的成血管细胞

李春;周诗君;翟志敏;周海胜;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.026

浏览(133)

吲哚菁绿排泄试验评估肝脏缺血再灌注损伤的临床研究

刘国岩;荚卫东;许戈良;李建生;马金良;葛勇胜;余继海;王伟;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.027

浏览(140)

不同方法在修复腭裂术后穿孔中的应用

陈新;王元银;周健;王银龙;何家才;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.028

浏览(139)

狭长窄蒂皮瓣治疗面额部皮肤癌的临床应用

张超;林锋;冷明;王秋艳;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.029

浏览(148)

人FKBP3在哺乳动物细胞系中的转染表达与定位

龚芮;潘林鑫;张姗靖;耿慧武;刘晓颖;范礼斌;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.030

浏览(131)

羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸骨组织工程支架材料生物相容性研究

吕洪磊;张彩云;顾玉芳;王云;赵宇;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.031

浏览(147)

胆石症发病部位危险因素相关性分析

李玥;方海明;章礼久;唐敏;周玉保;张道权;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.032

浏览(156)

女性慢性特发性荨麻疹血清脱氢表雄酮硫酸酯水平检测及意义

何泽生;岳良;安国芝;孟昭影;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.033

浏览(143)

同种异体原位心脏移植10例应用体会

严宇;严中亚;朱正艳;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.034

浏览(143)

信号传导与转录活化子3与肿瘤侵袭转移

张传海;许戈良;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.035

浏览(129)

同种异体骨移植的研究进展

赵丹;李同林;马勇;王培民;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.037

浏览(150)

满山红的化学成分和提取方法研究进展

赵玺;车文实;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.038

浏览(136)

以果蝇表达载体系统构建可稳定表达抗菌性多肽Trappin-2的S2细胞株

赵秀玲;何金生;

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.05.036

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摘要:
目的采用果蝇S2表达系统,构建可与S2细胞基因组整合的分别含有Trappin-2和EGFP的重组质粒,筛选出两种抗性稳定可表达Trappin-2和EGFP的多克隆S2细胞株,为后期研究Trappin-2黏膜佐剂等生物学活性奠定基础。方法首先对pMT/Bip/V5-His A果蝇表达载体进行改造,去掉pMT/Bip/V5-His A的Bip信号肽,改造成为pMT/V5-His A,采用RT-PCR方法从A549细胞中得到含信号肽的、完整的Trappin-2基因,在引物的5'端引入NotⅠ酶切位点及Kozak序列;引物的3'端引入XhoⅠ酶切位点和双终止密码子。利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pMT/V5-His A中,得到重组表达质粒pMT-Trappin-2(简称pMT-T2)真核表达载体。为了观察、比较转染效率和表达水平,同时构建了带有增强型绿色荧光蛋白(EG-FP)的载体pMT/V5-His A-EGFP(简称pMT/EG-FP)。采用脂质体介导的转染技术将鉴定正确的两种质粒pMT-T2和pMT-EGFP分别与抗性筛选质粒pCoHygro(简称pro)共转入果蝇S2细胞中,用含有300 mg/ml潮霉素B的完全培养基进行筛选,经过3～4周,筛选出两种抗性稳定多克隆S2细胞株,用终浓度为500μmol/L的CuSO4诱导表达48 h后,分别通过荧光显微镜、RT-PCR和Western blot分析目的蛋白在S2细胞中的表达水平。结果采用RT-PCR方法从A549细胞中得到Trappin-2基因,通过NotⅠ和XhoⅠ双酶切位点将Trappin-2克隆入改造好的pMT/V5-His A载体上,构建了pMT-T2和pMT-EGFP质粒,应用脂质体转染技术将真核表达载体和抗性筛选质粒pro共转染果蝇S2细胞,通过潮霉素B反复筛选,3～4周后,成功筛选到两种稳定的抗性多克隆细胞株,分别命名为S2-Trappin-2和S2-EGFP,用CuSO4分别诱导两个细胞株,在荧光显微镜下可观察到S2-EGFP主要表现为胞浆绿色荧光,RT-PCR结果证实Trappin-2在S2细胞中可稳定表达,Western blot分析S2-Trappin-2细胞培养上清可见分子量约10 ku的特异性条带,成功建立可稳定高表达Trappin-2和EGFP蛋白的果蝇S2细胞系。结论成功克隆了Trappin-2基因,并利用果蝇表达系统筛选到可分别稳定表达Trappin-2和EGFP的S2细胞株。S2-Trappin-2稳定表达细胞株的建立为进一步研究Trappin-2生物学特性、黏膜佐剂作用及在肺部感染等疾病中的应用奠定了基础。

安徽医科大学

DOI: DOI:

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